是说该总结了,我这拖拖拉拉搞到现在才发,我现在除了发每日的行程也会讲一下我今天学到的东西。首先今天上午去了另一个大学,去见了两位老师,这个老师是研究核蛋白,他想做普通蛋白组学,他就是想看处理前后差异蛋白的上下调,也有想看他感兴趣的或者目的蛋白的上下调,他那个目的蛋白叫做ha,是个转录因子相关,由于他那个目的蛋白在细胞核内,所以含量很低。很难检测得到,因为质谱他只会打丰度前20的一个蛋白,然后我们给他解决的方法是让他分级。就是在蛋白过液相的时候进行理化性质的分级与分类。比如说疏水的分为一类,亲水的分为一类,这样可能可以把高丰度蛋白给归到一类。从而增大打到低丰度蛋白的概率。缺点是耗钱,每分多一次类就要增加多一个样本的钱,另外客户就是想单独看他那个ha的互作蛋白,他就coIP之后打不到ha,技术给他回答的是,ip之后用wb(免疫蛋白印记)验证目的蛋白,如果转膜之后孵化目的蛋白有条带,那么90%都能打的出来。然后还有学到就是胰酶酶切的氨基酸为K和R,就是质谱蛋白质变成肽段,用胰酶切,切的是赖氨酸和精氨酸。然后wb具有转膜后有极点放大的效应,就是蛋白量很少。转膜之后的条带灰度值也可以很亮。
接着继续回到客户的问题,就是说ha丰度低的话,可以过表达之后进行转染flag。后面用flag标签抗体拉ha蛋白。但是客户那边不能确认flag标签转染之后会不会对表型产生影响。一般来说不会,技术说。然后还学到一点,体内实验指的是在生物体内实验,体外实验指的是在细胞进行,体内实验一般时间要很长,因为要把实验对象培育好,比如说老鼠啊。或者植物,只是让他们长大之后再进行。打药,打毒药或者是其他处理,在体内进行实验的话,影响因素更多,就更不容易稳定,而体外实验的话细胞长得快,而且可以培养,整个实验周期就很快。
继续回到客户这边,客户这边最终我们是给他建议分级处理,然后让他先收集核蛋白。尽量收集多的核蛋白,让我们去给他打质谱。另一个客户也没聊什么,他是做羟基化的。下午送龙哥去机场,送到之后大概是2:30,说实话,我当时我其实不太想去跑了。我想找个地方去。玩一下,放纵一下,打打游戏,但是又觉得没有多少意思,磨磨蹭蹭,在路上休息了一下,又开了一个多小时的车回到早上的大学,然后从4:30开始陌拜到5点35,没有什么意向,但是把单页铺出去也是很有用的,晚上回到出租屋这边已经快要8点了,说实话,真挺想去放纵一下去网吧打一下漫威争锋,玩一下然后再睡个懒觉明天,欲望很强各种想去玩,但是欲望这东西就高山滚石永远是滚不完的。我还是没有去网吧,就回到宿舍。帮老妈办了一些事情,就是一直的看漫画和刷视频,洗澡到现在。总结一下情况,我要每天都看一篇姐姐的文献呢,就在早上。坐地铁到客户单位的时候看,早上是真的挤得像麻瓜,另外截止到现在的话,销售额达到了18000。其中4000是12月初。在a医院一个客户做coip鉴定,然后就是有一个客户想做棕榈酰试剂盒,他的用量比较大嘛,由于他之前是在经销商买的 然后给我找到了。我就给他说我们最近预付款的活动让他预充值1万,然后我们给他1.1万的数额,增值10%,然后试剂盒的价格再给他经销商的价格相当于减少20%。然后试剂盒买大送小买两个24的送一个4次的,也跟了有一个多星期解决他一些问题,主要是怎么报账的问题,就是走合同不走锐竞平台。然后由于他们经费目前还不够,就先让他们先把合同走了,然后报账晚点报都行。这样子1万应该就没什么问题。然后还有4000也是购买试剂盒的。我赠送了京东卡作为礼品,可以了,就这样结束今天。
