班德液氮罐http://www.yedanguan365.com
1. 冻存管的准备
　　进口2.0 ml已灭菌内螺旋冻存管。型号：Corning 2028, Corning公司。
　　2. 保护剂的准备
　　分析纯甘油加纯水配制成20%浓度，灭菌。
　　3. 微生物保藏物的准备
　　微生物不同的生理状态对存活率有影响，一般使用静止期或成熟期培养物。菌种的准备可采用下列两种方法：
　　1)刮取培养物平板上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内;
　　2) 接种液体培养基，振荡培养后将菌悬液离心，去上清，将菌体与保护剂混合分装于冻存管内。
　　每个冻存管的分装量为1ml。
　　冻存管的标记为管外标记，用专用的非水溶性记号笔标记菌种保藏编号与保藏日期。
　　注意：分装与标记时要多次核对该菌种与所分装管的标记是否正确无误。
　　4. 预冻
　　使用分段降温法：将分装后的菌种管先放4oC冰箱，半小时后放-20℃冰箱中2小时，然后放80oC冰箱2小时以上， 取出后放入液氮罐中快速冷冻。
　　对耐低温的微生物可以直接放入气相或液相氮中。
　　5. 保藏
　　将塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相中温度为-150℃，液相中温度为-196℃。
　　6. 保藏周期
　　一般10年以上。
　　7. 复苏方法
　　从液氮罐中取出冻存管，立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
　　8. 适用范围
　　各类微生物。
　　9. 液氮保藏应注意事项
　　■防止冻伤，操作注意安全，带面罩及防冻手套;
　　■塑料冻存管一定要拧紧螺帽;
　　■运送液氮时一定要用专用特制的容器，绝不可用密闭容器存放或运输液氮，切勿使用保温瓶存放液氮;
　　■注意存放液氮容器的室内通风，防止过量氮气使人窒息;
　　■防止塑料冻存管破裂爆炸，如液氮渗入管内，当从液氮容器取出时，液态氮体积膨胀约680倍，爆炸力很大，应特别小心;
　　■注意观察液氮容器中液氮的残存量，定期补充液氮。
　　10. 质量检查
　　保存一段时间后抽取1-2支冻存管进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。