大家好，今天跟大家分享一篇题为Identific ation of the Wnt signal peptide that directs secretion on extracellular vesicles（指导细胞外囊泡分泌的Wnt信号肽的鉴定）Wnt蛋白是疏水性糖蛋白，其能够进行长距离信号传导的特性使得肌肉损伤后Wnt7a长距离分泌到细胞外囊泡(EVs)表面。本研究通过在Wnt中定义EVs分泌所需的信号肽区域，即外泌体结合肽(EBP)，将EBP添加到无关的蛋白质中，指导EVs的分泌。
01
研究背景
Wnt 蛋白是疏水性糖蛋白，但能够进行长程信号传导。我们发现 Wnt7a 在肌肉损伤后在细胞外囊泡 （EV） 表面长距离分泌。我们在 Wnts 中定义了 EV 上分泌所需的信号肽区域，称为外泌体结合肽 （EBP）。将 EBP 添加到 EV 上不相关的蛋白质定向分泌物中。棕榈酰化和信号肽不是 Wnt7a-EV 分泌所必需的。Coatomer 被鉴定为 EBP 的 EV 结合蛋白。共晶体结构、结合热力学和诱变分析发现，二赖氨酸基序介导 EBP 与 coatomer 的结合，在整个 Wnt 家族中具有保守的功能。我们表明，在再生过程中在体内表达时，EBP 是 Wnt7a 生物活性所必需的。总体而言，我们的研究阐明了 Wnt 在 EV 上分泌的结构基础和奇异性，而不是经典分泌，为创新的治疗靶向策略和全身蛋白递送开辟了途径。
见图一
肌肉损伤会触发 EV 表面分泌 Wnt7a。
图一
(A） 野生型 （WT） 小鼠 CTX 损伤后 96 小时新再生肌纤维的抗 Wnt7a 标记的 iTEM 显示 Wnt7a 分泌在 MVB 中包含的 ILV 上。比例尺，500 和 100 nm。
（B） WT 小鼠受伤 TA 肌肉的抗 Wnt7a 标记的 iTEM 显示 Wnt7a 存在于浸润到围绕新再生肌纤维的受伤组织上的 EV 上。比例尺，500 和 100 nm。
（C） 显示 Wnt7a 表达的肌肉 EVs 分数的免疫印迹分析。
（D） 用于在表达 Myf5 的细胞中生成条件性 Wnt7a floxed 的小鼠品系的示意图。
（E） Wnt7a 表达消除的免疫荧光确认Myf5（cre/+）：Wnt7a（FL/FL）在 CTX 损伤后 96 小时受伤的 TA。比例尺，50 μm。
（F） EV 抗 Wnt7a 标记的 iTEM 显示 Wnt7a 在 EV 中的表达被消除Myf5（cre/+）： Wnt7a（FL/FL）小鼠肌肉外植体。比例尺，100 nm。
（G） 分离的 EV 中 Wnt7a 表达消除的免疫印迹验证从 Myf5（cre/+）： Wnt7a（FL/FL）CTX 损伤后 96 小时的后肢肌肉。
（H） 含有 Wnt7a 的肌肉 EVs 刺激后肥大肌管的 pMHC 免疫荧光代表性图像 （n = 3）。比例尺，50 μm。实验代表 n = 4 个生物学重复。
（I） 用肌肉 EV 处理的小鼠原代肌管的肥大试验降低了 Wnt7a 缺失后的肥大。Wnt7a 重组蛋白用作阳性对照。n = 3 只小鼠，每只小鼠有 8 个技术重复，均± SEM。P 值由双侧学生 t 检验确定（*P < 0.05，**P < 0.005，***P < 0.0005）。iTEM，免疫金透射电子显微镜;MVBs，多泡体;pMHC，泛肌球蛋白重链。
见图二
EV 上的 Wnt7a 分泌受内部肽序列的调节。
图二
(A） 免疫印迹分析显示 EV 分泌在超过 100 位氨基酸后中断，但在第 300 位后没有中断。
（B） 免疫印迹分析显示 Wnt7a 的内部 100 至 300 个氨基酸序列足以用于 EV 分泌。
（C） ΔG折叠X的 Wnt7a 表明 Δ1-49 和 Δ301-349 不影响折叠（相对于 WT 蛋白而言，ΔΔG < 0），并且功能不会丢失。Δ1-212 影响蛋白质折叠。Δ251–349 不影响折叠，但由于 EBP 的一个区域被截断，功能会丢失。
（D） Wnt7a 表面，红色为带负电荷的残基，蓝色为带正电荷的残基，绿色为疏水残基。EBP 带正电。
（E） 免疫印迹分析表明，用 GSGS 接头替代 EBP 可消除 EV 分泌，有利于非 EV Wnt7a 分泌。FP，游离蛋白。
（F） 定量 Wnt7a 在有和没有 EBP 的 EV 和非 EV 蛋白组分上的表达。实验代表了在转染不同 Wnt7a-HA 标记截断的 HEK293T 细胞中进行的三个独立的生物学重复。n = 3 次生物学重复，均值± SEM。P 值由双侧学生 t 检验确定 （***P < 0.0005）。HA，血凝素。
见图三
EBP 足以授予 EV 目标。
图三
（A） 通过将 EBP 插入 EV 上未分泌的 Wnt7a 截短物的上游结构域来恢复 EV 分泌。插入不会影响全长蛋白质的稳定性 （Wnt7a-Δ3aa*GSG 与 Wnt7a-Δ3aa*EBP）。将 EBP 插入该位点 （Wnt7a-Δ213-249*EBP） 可恢复 EVs 定位为 Wnt7a-Δ213-249。
（B） C 端连接的 EBP 而不是 N 端连接的 EBP 赋予 Wnt7a-Δ213-249 对 EV 的靶向性。
（C） EBP HALO 蛋白的连接导致 EV 分泌。
（D） 具有抗 HALO 免疫染色的 EV 的 iTEM 图像，显示 HALO*EBP 在 EV 表面的表达。比例尺，100 μm。
（E） 用 HALO*EBP EV 处理后HEK293T细胞内通过荧光检测 HALO 与来自转染不同 Wnt7a-HA 和 HALO 标记截断物的 HEK293T 细胞的 HALO EV。n = 3 个生物学重复。
见图四
EV 上的 Wnt7a 分泌似乎独立于经典途径，需要 Coatomer。
图四
(A） 转染的 HEK293T 细胞中 EVs-Wnt7a 的分泌不需要 SP。
（B） 缺乏棕榈酰化位点的突变 Wnt7a_S206A 在转染的 HEK293T 细胞的 EV 上分泌。
（C） PORCN 的药物抑制不会影响 EV 上 Wnt7a 的分泌。
（D） siRNA 中 WLS 的敲低部分影响 EV 上 Wnt7a 的分泌，但确实会消除非 EV Wnt7a 的分泌。
（E） 用于 BioID 分析的 BirA 构建体。
（F） 显示折叠变化的热图（日志2scale） 的 6 ESP_BirA：BirA 和 Wnt7a_BirA：BirA）。显示的是 >50% 的富集 [log2（FC） > 0.5849] 和 EBP 阳性富集 [对数2（FC） > 0] 在 Wnt7a 上。
（G） Wnt7a：在表达 Wnt7a-BirA 或 BirA 的小鼠原代肌管中进行的 COPA PLA（红色）。绿色为 GM310，蓝色为 4′，6-二脒基-2-苯基吲哚 （DAPI）。比例尺，10 μm。
（H） Wnt7a：COPA PLA（橙色）在 RPTEC-hTERT1 细胞中进行。绿色为小麦胚芽凝集素 （WGA），蓝色为 DAPI。CTR-neg 是没有 Wnt7a 抗体的对照。比例尺，10 μm。
（I） Wnt7a 分泌于 RPTEC-hTERT1 细胞衍生的 EV 上。HEK293T 缺乏 Wnt7a 的细胞用作阴性对照。
（J） 在表达 Wnt7a-FL、Wnt7a_ΔEBP*GSGS 或 Wnt7a_ΔSP 的 HEK293T 细胞中进行 Wnt7a：COPA PLA（红色）。绿色的 GM310 和蓝色的 DAPI。比例尺，10 μm。CTR-neg 是没有 Wnt7a 抗体的对照。
（K） Wnt7a-HA 与 COPA 和 COPB2 相互作用。HEK293T 过表达 Wnt7a-HA 的细胞用 COPB2 抗体免疫沉淀或 （L） 用 HA 抗体免疫沉淀。
（M） COPA 和 COPB2 敲低 siRNA 后 Wnt7a 的免疫印迹 EV 分泌分析显示转染 HEK293T 细胞中 Wnt7a-EV 分泌中断。n = 3 个生物学重复。IgG，免疫球蛋白 G;WGA，小麦胚芽凝集素。
见图五
Wnt7a 结合 Coatomer 蛋白。
图五
(A） 预测 AlphaFold 中的 Wnt7a 结构（蓝色），其中 EBP 区域以橙色突出显示，EBP 内有三个带正电荷的基序（红色）。请注意，EBP 是一个溶剂暴露区域。
（B） Wnt7a-ESP*Scramble 突变体保持二赖氨酸基序，并且 EV 分泌没有受损。
（C） COPB2 的 ITC 测量1–304与 EBP 内潜在的二赖氨酸/精氨酸基序结合。WT COPB21–304绑定到 LKIKKP 子区域。
（D 到 F） 与 COPB2 结合的 Wnt7a 的 KxKx 基序的视图1–304.（D） COPB 的 WD 重复结构域的俯视图1–304（绿色）与 LKIKKP 肽（橙色）呈带状。（E） LKIKKP 肽的特写图，通过省略肽计算出差异电子密度图，并以 3σ（蓝色网格）等高线计算。COPB2 表面由静电电位着色，范围为 −5 kT/e（红色）至 5 kT/e（蓝色）。（F） 具有氢键和距离的结合基序的侧视图。
（G） 基于结构的点突变证实了 ITC 测定中 KxKx 基序的分子识别。
（H） 丙氨酸对 K253 和 K255 的双赖氨酸突变破坏了 Wnt7a-EV 的分泌。
（I） 用含有 KR 和 RR 的 Wnt10a-EBP 或 Wnt16 EBP 替代 Wnt7a-EBP（右）。用 Wnt10a-EBP 或 Wnt16 EBP 替代可挽救 Wnt7a-EV 分泌。
（J） EBP 去除或 EBP 内双精氨酸突变后 Wnt10b 的 EV 分泌分析 （右）。双精氨酸突变破坏 EV 上 Wnt10b 的分泌，其程度与去除整个 Wnt10b EBP 序列的程度相同。
（K） EBP 内整个带正电荷的基序 RPR、KHR 和 KH 的 EBP 去除或突变后 Wnt3a 的分泌分析（右）。只有 RPR 和 KHR 基序的伴随突变才会破坏 EVS 上 Wnt3a 的分泌，其程度与去除整个 Wnt3a EBP 序列的程度相同。n = 3 个生物重复。
见图六
Wnt7a 与 Coatomer 的相互作用是肌肉再生反应所必需的。
图六
（A） 使用 siRNA 敲低 COPA 和 COPB2 会破坏稳定表达原代成肌细胞的 Wnt7a 中的 Wnt7a-EV 分泌。
（B） 敲除 COPA 和 COPB2 可降低 Wnt7a 转染肌管的肥大。相反，敲低不会影响不表达 Wnt7a 的肌管肥大。
（C） 在肌管中同时敲低 COPA 和 COPB2 的 siRNA 后的代表性图像。比例尺，50 μm。
（D） 体内工作流程的示意图。
（E） 比较 TA 电穿孔与 Wnt7a（绿色）与 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）的肌纤维口径分布。
（F） 使用 Wnt7a（绿色）和 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）电穿孔的 TA 的平均最小纤维费雷特。
（G） 比较 TA 电穿孔 Wnt7a（绿色）与 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）的纤维数定量。
（H） 比较 Wnt7a（绿色）和 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）电穿孔的 TA 的肌肉面积定量。
（I） 将 Wnt7a_ΔEBP*GSGS 电穿孔到 mdx 小鼠的 TA 肌肉后，TA 肌肉切片显示肌纤维口径降低，肌纤维数量增加。比例尺，100 μm。TA， 胫骨前部。体外实验代表了在小鼠原代成肌细胞中进行的三个独立的生物学重复。体内实验具有代表性 n = 6 只小鼠，均± SEM。P 值由双侧学生 t 检验确定（*P < 0.05 和 **P < 0.005）。
02
研究结论
总之，我们发现 Coatomer 成分在急性损伤后 EV 上分泌 Wnts 中具有额外的作用。我们已经阐明了 Wnt7a 与 Coatomer 结合的结构基础及其在 EV 外表面的分泌。我们的结果填补了长程 Wnt 分泌途径奇异性的基本知识空白。我们已经定义了 Wnt-Coatomer 相互作用的序列要求，并表明多个 Wnt 的 EV 分泌也涉及类似的机制。此外，我们的实验表明，肌肉再生过程中体内 Wnt7a 的生理分泌是由 EVs 介导的，阐明了 Wnts 在体内长距离信号的能力。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！如果你正在开展临床研究.需要方案设计.数据管理. 数据分析等支持.也随时可以联系我们。
01
研究背景
Wnt 蛋白是疏水性糖蛋白，但能够进行长程信号传导。我们发现 Wnt7a 在肌肉损伤后在细胞外囊泡 （EV） 表面长距离分泌。我们在 Wnts 中定义了 EV 上分泌所需的信号肽区域，称为外泌体结合肽 （EBP）。将 EBP 添加到 EV 上不相关的蛋白质定向分泌物中。棕榈酰化和信号肽不是 Wnt7a-EV 分泌所必需的。Coatomer 被鉴定为 EBP 的 EV 结合蛋白。共晶体结构、结合热力学和诱变分析发现，二赖氨酸基序介导 EBP 与 coatomer 的结合，在整个 Wnt 家族中具有保守的功能。我们表明，在再生过程中在体内表达时，EBP 是 Wnt7a 生物活性所必需的。总体而言，我们的研究阐明了 Wnt 在 EV 上分泌的结构基础和奇异性，而不是经典分泌，为创新的治疗靶向策略和全身蛋白递送开辟了途径。
见图一
肌肉损伤会触发 EV 表面分泌 Wnt7a。
图一
(A） 野生型 （WT） 小鼠 CTX 损伤后 96 小时新再生肌纤维的抗 Wnt7a 标记的 iTEM 显示 Wnt7a 分泌在 MVB 中包含的 ILV 上。比例尺，500 和 100 nm。
（B） WT 小鼠受伤 TA 肌肉的抗 Wnt7a 标记的 iTEM 显示 Wnt7a 存在于浸润到围绕新再生肌纤维的受伤组织上的 EV 上。比例尺，500 和 100 nm。
（C） 显示 Wnt7a 表达的肌肉 EVs 分数的免疫印迹分析。
（D） 用于在表达 Myf5 的细胞中生成条件性 Wnt7a floxed 的小鼠品系的示意图。
（E） Wnt7a 表达消除的免疫荧光确认Myf5（cre/+）：Wnt7a（FL/FL）在 CTX 损伤后 96 小时受伤的 TA。比例尺，50 μm。
（F） EV 抗 Wnt7a 标记的 iTEM 显示 Wnt7a 在 EV 中的表达被消除Myf5（cre/+）： Wnt7a（FL/FL）小鼠肌肉外植体。比例尺，100 nm。
（G） 分离的 EV 中 Wnt7a 表达消除的免疫印迹验证从 Myf5（cre/+）： Wnt7a（FL/FL）CTX 损伤后 96 小时的后肢肌肉。
（H） 含有 Wnt7a 的肌肉 EVs 刺激后肥大肌管的 pMHC 免疫荧光代表性图像 （n = 3）。比例尺，50 μm。实验代表 n = 4 个生物学重复。
（I） 用肌肉 EV 处理的小鼠原代肌管的肥大试验降低了 Wnt7a 缺失后的肥大。Wnt7a 重组蛋白用作阳性对照。n = 3 只小鼠，每只小鼠有 8 个技术重复，均± SEM。P 值由双侧学生 t 检验确定（*P < 0.05，**P < 0.005，***P < 0.0005）。iTEM，免疫金透射电子显微镜;MVBs，多泡体;pMHC，泛肌球蛋白重链。
见图二
EV 上的 Wnt7a 分泌受内部肽序列的调节。
图二
(A） 免疫印迹分析显示 EV 分泌在超过 100 位氨基酸后中断，但在第 300 位后没有中断。
（B） 免疫印迹分析显示 Wnt7a 的内部 100 至 300 个氨基酸序列足以用于 EV 分泌。
（C） ΔG折叠X的 Wnt7a 表明 Δ1-49 和 Δ301-349 不影响折叠（相对于 WT 蛋白而言，ΔΔG < 0），并且功能不会丢失。Δ1-212 影响蛋白质折叠。Δ251–349 不影响折叠，但由于 EBP 的一个区域被截断，功能会丢失。
（D） Wnt7a 表面，红色为带负电荷的残基，蓝色为带正电荷的残基，绿色为疏水残基。EBP 带正电。
（E） 免疫印迹分析表明，用 GSGS 接头替代 EBP 可消除 EV 分泌，有利于非 EV Wnt7a 分泌。FP，游离蛋白。
（F） 定量 Wnt7a 在有和没有 EBP 的 EV 和非 EV 蛋白组分上的表达。实验代表了在转染不同 Wnt7a-HA 标记截断的 HEK293T 细胞中进行的三个独立的生物学重复。n = 3 次生物学重复，均值± SEM。P 值由双侧学生 t 检验确定 （***P < 0.0005）。HA，血凝素。
见图三
EBP 足以授予 EV 目标。
图三
（A） 通过将 EBP 插入 EV 上未分泌的 Wnt7a 截短物的上游结构域来恢复 EV 分泌。插入不会影响全长蛋白质的稳定性 （Wnt7a-Δ3aa*GSG 与 Wnt7a-Δ3aa*EBP）。将 EBP 插入该位点 （Wnt7a-Δ213-249*EBP） 可恢复 EVs 定位为 Wnt7a-Δ213-249。
（B） C 端连接的 EBP 而不是 N 端连接的 EBP 赋予 Wnt7a-Δ213-249 对 EV 的靶向性。
（C） EBP HALO 蛋白的连接导致 EV 分泌。
（D） 具有抗 HALO 免疫染色的 EV 的 iTEM 图像，显示 HALO*EBP 在 EV 表面的表达。比例尺，100 μm。
（E） 用 HALO*EBP EV 处理后HEK293T细胞内通过荧光检测 HALO 与来自转染不同 Wnt7a-HA 和 HALO 标记截断物的 HEK293T 细胞的 HALO EV。n = 3 个生物学重复。
见图四
EV 上的 Wnt7a 分泌似乎独立于经典途径，需要 Coatomer。
图四
(A） 转染的 HEK293T 细胞中 EVs-Wnt7a 的分泌不需要 SP。
（B） 缺乏棕榈酰化位点的突变 Wnt7a_S206A 在转染的 HEK293T 细胞的 EV 上分泌。
（C） PORCN 的药物抑制不会影响 EV 上 Wnt7a 的分泌。
（D） siRNA 中 WLS 的敲低部分影响 EV 上 Wnt7a 的分泌，但确实会消除非 EV Wnt7a 的分泌。
（E） 用于 BioID 分析的 BirA 构建体。
（F） 显示折叠变化的热图（日志2scale） 的 6 ESP_BirA：BirA 和 Wnt7a_BirA：BirA）。显示的是 >50% 的富集 [log2（FC） > 0.5849] 和 EBP 阳性富集 [对数2（FC） > 0] 在 Wnt7a 上。
（G） Wnt7a：在表达 Wnt7a-BirA 或 BirA 的小鼠原代肌管中进行的 COPA PLA（红色）。绿色为 GM310，蓝色为 4′，6-二脒基-2-苯基吲哚 （DAPI）。比例尺，10 μm。
（H） Wnt7a：COPA PLA（橙色）在 RPTEC-hTERT1 细胞中进行。绿色为小麦胚芽凝集素 （WGA），蓝色为 DAPI。CTR-neg 是没有 Wnt7a 抗体的对照。比例尺，10 μm。
（I） Wnt7a 分泌于 RPTEC-hTERT1 细胞衍生的 EV 上。HEK293T 缺乏 Wnt7a 的细胞用作阴性对照。
（J） 在表达 Wnt7a-FL、Wnt7a_ΔEBP*GSGS 或 Wnt7a_ΔSP 的 HEK293T 细胞中进行 Wnt7a：COPA PLA（红色）。绿色的 GM310 和蓝色的 DAPI。比例尺，10 μm。CTR-neg 是没有 Wnt7a 抗体的对照。
（K） Wnt7a-HA 与 COPA 和 COPB2 相互作用。HEK293T 过表达 Wnt7a-HA 的细胞用 COPB2 抗体免疫沉淀或 （L） 用 HA 抗体免疫沉淀。
（M） COPA 和 COPB2 敲低 siRNA 后 Wnt7a 的免疫印迹 EV 分泌分析显示转染 HEK293T 细胞中 Wnt7a-EV 分泌中断。n = 3 个生物学重复。IgG，免疫球蛋白 G;WGA，小麦胚芽凝集素。
见图五
Wnt7a 结合 Coatomer 蛋白。
图五
(A） 预测 AlphaFold 中的 Wnt7a 结构（蓝色），其中 EBP 区域以橙色突出显示，EBP 内有三个带正电荷的基序（红色）。请注意，EBP 是一个溶剂暴露区域。
（B） Wnt7a-ESP*Scramble 突变体保持二赖氨酸基序，并且 EV 分泌没有受损。
（C） COPB2 的 ITC 测量1–304与 EBP 内潜在的二赖氨酸/精氨酸基序结合。WT COPB21–304绑定到 LKIKKP 子区域。
（D 到 F） 与 COPB2 结合的 Wnt7a 的 KxKx 基序的视图1–304.（D） COPB 的 WD 重复结构域的俯视图1–304（绿色）与 LKIKKP 肽（橙色）呈带状。（E） LKIKKP 肽的特写图，通过省略肽计算出差异电子密度图，并以 3σ（蓝色网格）等高线计算。COPB2 表面由静电电位着色，范围为 −5 kT/e（红色）至 5 kT/e（蓝色）。（F） 具有氢键和距离的结合基序的侧视图。
（G） 基于结构的点突变证实了 ITC 测定中 KxKx 基序的分子识别。
（H） 丙氨酸对 K253 和 K255 的双赖氨酸突变破坏了 Wnt7a-EV 的分泌。
（I） 用含有 KR 和 RR 的 Wnt10a-EBP 或 Wnt16 EBP 替代 Wnt7a-EBP（右）。用 Wnt10a-EBP 或 Wnt16 EBP 替代可挽救 Wnt7a-EV 分泌。
（J） EBP 去除或 EBP 内双精氨酸突变后 Wnt10b 的 EV 分泌分析 （右）。双精氨酸突变破坏 EV 上 Wnt10b 的分泌，其程度与去除整个 Wnt10b EBP 序列的程度相同。
（K） EBP 内整个带正电荷的基序 RPR、KHR 和 KH 的 EBP 去除或突变后 Wnt3a 的分泌分析（右）。只有 RPR 和 KHR 基序的伴随突变才会破坏 EVS 上 Wnt3a 的分泌，其程度与去除整个 Wnt3a EBP 序列的程度相同。n = 3 个生物重复。
见图六
Wnt7a 与 Coatomer 的相互作用是肌肉再生反应所必需的。
图六
（A） 使用 siRNA 敲低 COPA 和 COPB2 会破坏稳定表达原代成肌细胞的 Wnt7a 中的 Wnt7a-EV 分泌。
（B） 敲除 COPA 和 COPB2 可降低 Wnt7a 转染肌管的肥大。相反，敲低不会影响不表达 Wnt7a 的肌管肥大。
（C） 在肌管中同时敲低 COPA 和 COPB2 的 siRNA 后的代表性图像。比例尺，50 μm。
（D） 体内工作流程的示意图。
（E） 比较 TA 电穿孔与 Wnt7a（绿色）与 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）的肌纤维口径分布。
（F） 使用 Wnt7a（绿色）和 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）电穿孔的 TA 的平均最小纤维费雷特。
（G） 比较 TA 电穿孔 Wnt7a（绿色）与 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）的纤维数定量。
（H） 比较 Wnt7a（绿色）和 Wnt7a_ΔEBP*GSGS（灰色）电穿孔的 TA 的肌肉面积定量。
（I） 将 Wnt7a_ΔEBP*GSGS 电穿孔到 mdx 小鼠的 TA 肌肉后，TA 肌肉切片显示肌纤维口径降低，肌纤维数量增加。比例尺，100 μm。TA， 胫骨前部。体外实验代表了在小鼠原代成肌细胞中进行的三个独立的生物学重复。体内实验具有代表性 n = 6 只小鼠，均± SEM。P 值由双侧学生 t 检验确定（*P < 0.05 和 **P < 0.005）。
02
研究结论
总之，我们发现 Coatomer 成分在急性损伤后 EV 上分泌 Wnts 中具有额外的作用。我们已经阐明了 Wnt7a 与 Coatomer 结合的结构基础及其在 EV 外表面的分泌。我们的结果填补了长程 Wnt 分泌途径奇异性的基本知识空白。我们已经定义了 Wnt-Coatomer 相互作用的序列要求，并表明多个 Wnt 的 EV 分泌也涉及类似的机制。此外，我们的实验表明，肌肉再生过程中体内 Wnt7a 的生理分泌是由 EVs 介导的，阐明了 Wnts 在体内长距离信号的能力。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！如果你正在开展临床研究.需要方案设计.数据管理. 数据分析等支持.也随时可以联系我们。
