EdU法细胞增殖成像分析试剂盒
EdU（5 - 乙炔基 - 2'- 脱氧尿嘧啶核苷）法细胞增殖成像分析试剂盒是一种用于检测细胞增殖的工具，以下从原理、组成、操作步骤、应用等方面进行介绍：
原理
· 细胞在 DNA 合成期（S 期）会将 EdU 掺入到新合成的 DNA 中，EdU 含有乙炔基，能与荧光染料标记的叠氮化物通过铜离子催化的 Click 反应发生共价结合，形成稳定的三唑环结构。通过检测这种荧光标记，就能直观地观察到正在进行 DNA 合成的细胞，从而反映细胞的增殖情况。与传统的 BrdU 检测方法相比，EdU 法不需要进行 DNA 变性等破坏 DNA 双链结构的操作，对细胞的损伤更小，检测更灵敏，且操作更简便快捷。
试剂盒组成
· EdU 溶液：是细胞增殖检测的关键试剂，细胞在培养过程中会摄取 EdU 并将其掺入到新合成的 DNA 中。
· 反应试剂：包含用于 Click 反应的各种试剂，如含有荧光基团的叠氮化物、铜离子催化剂等，能与掺入 DNA 的 EdU 发生特异性反应，使增殖细胞发出荧光。
· 细胞固定液：用于固定细胞，保持细胞形态和细胞内生物分子的结构，使后续的检测能够准确进行。
· 细胞通透液：增加细胞膜的通透性，使反应试剂能够进入细胞内与 EdU 发生反应。
· 细胞核染色试剂：如 DAPI 等，用于对细胞核进行染色，以便在荧光显微镜下清晰地观察到细胞的核形态和定位，同时可作为细胞计数的参照。
· 阳性对照试剂：一般为已知具有较高增殖活性的细胞样本或能促进细胞增殖的试剂，用于验证试剂盒的有效性和实验操作的准确性。
· 阴性对照试剂：通常为未进行任何处理的正常细胞样本或不含 EdU 的培养基等，用于排除非特异性染色和背景干扰。
操作步骤
1. 细胞培养与 EdU 标记：将待检测的细胞接种到合适的培养容器中，培养至对数生长期。然后向培养基中加入适量的 EdU 溶液，继续培养一段时间，使正在进行 DNA 合成的细胞将 EdU 掺入到新合成的 DNA 中。培养时间根据细胞类型和增殖速度而定，一般为 2-4 小时。
2. 细胞固定：培养结束后，去除培养基，用 PBS 等缓冲液清洗细胞，然后加入细胞固定液，室温下固定细胞 15-30 分钟，固定完成后再用 PBS 清洗细胞。
3. 细胞通透：加入细胞通透液，室温孵育 5-10 分钟，使细胞膜具有足够的通透性，便于后续反应试剂进入细胞。之后再次用 PBS 清洗细胞。
4. Click 反应：按照试剂盒说明书的要求，将含有荧光叠氮化物和铜离子催化剂等的反应试剂混合均匀，加入到细胞中，在避光条件下室温孵育 30-60 分钟，使 EdU 与荧光叠氮化物发生 Click 反应。反应结束后，用 PBS 清洗细胞 3 次，去除未反应的试剂。
5. 细胞核染色：加入适量的细胞核染色试剂，如 DAPI，室温下避光染色 5-10 分钟，然后用 PBS 清洗细胞。
6. 成像分析：将细胞置于荧光显微镜或共聚焦显微镜下进行观察和拍照。EdU 标记的增殖细胞会发出特定颜色的荧光，而细胞核被 DAPI 染成蓝色，通过分析荧光图像，可以直观地观察到细胞的增殖情况，如计算增殖细胞的比例、观察增殖细胞在组织中的分布等。
应用
· 肿瘤研究：在肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等研究中，可用于检测肿瘤细胞的增殖活性，评估肿瘤细胞的生长速度，研究肿瘤细胞对不同药物或治疗方法的反应，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
· 干细胞研究：用于监测干细胞的自我更新和分化过程中的细胞增殖情况，了解干细胞的增殖特性和分化规律，为干细胞治疗和组织工程等领域的研究提供技术支持。
· 药物研发：在药物筛选和药效评价中，可快速、准确地检测药物对细胞增殖的影响，确定药物的半数抑制浓度（IC50）等参数，评估药物的细胞毒性和潜在的治疗效果，为新药研发提供重要的实验数据。
· 发育生物学研究：在胚胎发育、器官形成等研究中，可用于观察细胞的增殖动态，了解细胞增殖在胚胎发育和器官构建过程中的作用，揭示发育过程中的细胞生物学机制。
技术支持
亚科因（武汉）生物技术有限公司
Abbkine亚科因致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键生化检测试剂盒的研发、生产和销售,成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。
EdU（5 - 乙炔基 - 2'- 脱氧尿嘧啶核苷）法细胞增殖成像分析试剂盒是一种用于检测细胞增殖的工具，以下从原理、组成、操作步骤、应用等方面进行介绍：
原理
· 细胞在 DNA 合成期（S 期）会将 EdU 掺入到新合成的 DNA 中，EdU 含有乙炔基，能与荧光染料标记的叠氮化物通过铜离子催化的 Click 反应发生共价结合，形成稳定的三唑环结构。通过检测这种荧光标记，就能直观地观察到正在进行 DNA 合成的细胞，从而反映细胞的增殖情况。与传统的 BrdU 检测方法相比，EdU 法不需要进行 DNA 变性等破坏 DNA 双链结构的操作，对细胞的损伤更小，检测更灵敏，且操作更简便快捷。
试剂盒组成
· EdU 溶液：是细胞增殖检测的关键试剂，细胞在培养过程中会摄取 EdU 并将其掺入到新合成的 DNA 中。
· 反应试剂：包含用于 Click 反应的各种试剂，如含有荧光基团的叠氮化物、铜离子催化剂等，能与掺入 DNA 的 EdU 发生特异性反应，使增殖细胞发出荧光。
· 细胞固定液：用于固定细胞，保持细胞形态和细胞内生物分子的结构，使后续的检测能够准确进行。
· 细胞通透液：增加细胞膜的通透性，使反应试剂能够进入细胞内与 EdU 发生反应。
· 细胞核染色试剂：如 DAPI 等，用于对细胞核进行染色，以便在荧光显微镜下清晰地观察到细胞的核形态和定位，同时可作为细胞计数的参照。
· 阳性对照试剂：一般为已知具有较高增殖活性的细胞样本或能促进细胞增殖的试剂，用于验证试剂盒的有效性和实验操作的准确性。
· 阴性对照试剂：通常为未进行任何处理的正常细胞样本或不含 EdU 的培养基等，用于排除非特异性染色和背景干扰。
操作步骤
1. 细胞培养与 EdU 标记：将待检测的细胞接种到合适的培养容器中，培养至对数生长期。然后向培养基中加入适量的 EdU 溶液，继续培养一段时间，使正在进行 DNA 合成的细胞将 EdU 掺入到新合成的 DNA 中。培养时间根据细胞类型和增殖速度而定，一般为 2-4 小时。
2. 细胞固定：培养结束后，去除培养基，用 PBS 等缓冲液清洗细胞，然后加入细胞固定液，室温下固定细胞 15-30 分钟，固定完成后再用 PBS 清洗细胞。
3. 细胞通透：加入细胞通透液，室温孵育 5-10 分钟，使细胞膜具有足够的通透性，便于后续反应试剂进入细胞。之后再次用 PBS 清洗细胞。
4. Click 反应：按照试剂盒说明书的要求，将含有荧光叠氮化物和铜离子催化剂等的反应试剂混合均匀，加入到细胞中，在避光条件下室温孵育 30-60 分钟，使 EdU 与荧光叠氮化物发生 Click 反应。反应结束后，用 PBS 清洗细胞 3 次，去除未反应的试剂。
5. 细胞核染色：加入适量的细胞核染色试剂，如 DAPI，室温下避光染色 5-10 分钟，然后用 PBS 清洗细胞。
6. 成像分析：将细胞置于荧光显微镜或共聚焦显微镜下进行观察和拍照。EdU 标记的增殖细胞会发出特定颜色的荧光，而细胞核被 DAPI 染成蓝色，通过分析荧光图像，可以直观地观察到细胞的增殖情况，如计算增殖细胞的比例、观察增殖细胞在组织中的分布等。
应用
· 肿瘤研究：在肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等研究中，可用于检测肿瘤细胞的增殖活性，评估肿瘤细胞的生长速度，研究肿瘤细胞对不同药物或治疗方法的反应，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
· 干细胞研究：用于监测干细胞的自我更新和分化过程中的细胞增殖情况，了解干细胞的增殖特性和分化规律，为干细胞治疗和组织工程等领域的研究提供技术支持。
· 药物研发：在药物筛选和药效评价中，可快速、准确地检测药物对细胞增殖的影响，确定药物的半数抑制浓度（IC50）等参数，评估药物的细胞毒性和潜在的治疗效果，为新药研发提供重要的实验数据。
· 发育生物学研究：在胚胎发育、器官形成等研究中，可用于观察细胞的增殖动态，了解细胞增殖在胚胎发育和器官构建过程中的作用，揭示发育过程中的细胞生物学机制。
技术支持
亚科因（武汉）生物技术有限公司
Abbkine亚科因致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键生化检测试剂盒的研发、生产和销售,成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。
