使用方法
(一)准备工作
样品准备:确保 DNA 样品已经经过适当的提取和纯化步骤,并且其浓度和纯度符合实验要求。例如,如果是从细胞中提取的基因组 DNA,要经过蛋白酶 K 消化、酚 - 氯仿抽提和乙醇沉淀等步骤,以获得相对纯净的 DNA。
电泳设备准备:提前准备好电泳槽、琼脂糖凝胶(已正确制备并放置在电泳槽中)、电泳缓冲液(如 TAE 或 TBE 缓冲液),并且连接好电泳仪,设置好合适的电压和电泳时间。
(二)混合样品与 loading buffer
一般情况下,按照 1:5(loading buffer:DNA 样品)的体积比混合。例如,如果 DNA 样品体积为 10μL,那么需要加入 2μL 的 6×loading buffer。这样可以保证 loading buffer 中的成分能够有效地发挥作用,同时不会过度稀释 DNA 样品。使用微量移液器准确地吸取相应体积的 6×loading buffer 加入到 DNA 样品管中。
轻轻混匀,注意避免产生气泡。可以通过轻微地上下颠倒或用手指轻弹管底的方式来混合,因为气泡可能会影响加样的准确性,而且在电泳过程中可能会干扰 DNA 的迁移。
(三)加样
将混合好的含有 DNA 和 6×loading buffer 的样品,小心地加入到琼脂糖凝胶的加样孔中。使用微量移液器,将移液器的枪头垂直插入加样孔,缓慢地将样品推出枪头。加样时要注意不要让样品溢出加样孔,同时尽量避免枪头刺破凝胶,因为这可能会影响 DNA 的迁移路径和电泳结果。
(四)电泳
在完成加样后,盖上电泳槽盖子,开启电泳仪,按照预先设定的电压和时间进行电泳。例如,对于较小片段的 DNA(小于 1kb),在 1% 琼脂糖凝胶中可以使用 80 - 100V 的电压,电泳时间约为 30 - 40 分钟;对于较大片段的 DNA(大于 10kb),电压可以适当降低至 40 - 60V,电泳时间延长至 1 - 2 小时,具体情况需要根据实际的实验要求和 DNA 片段大小进行调整。在电泳过程中,可以观察示踪染料的迁移情况来判断电泳进程。
(一)准备工作
样品准备:确保 DNA 样品已经经过适当的提取和纯化步骤,并且其浓度和纯度符合实验要求。例如,如果是从细胞中提取的基因组 DNA,要经过蛋白酶 K 消化、酚 - 氯仿抽提和乙醇沉淀等步骤,以获得相对纯净的 DNA。
电泳设备准备:提前准备好电泳槽、琼脂糖凝胶(已正确制备并放置在电泳槽中)、电泳缓冲液(如 TAE 或 TBE 缓冲液),并且连接好电泳仪,设置好合适的电压和电泳时间。
(二)混合样品与 loading buffer
一般情况下,按照 1:5(loading buffer:DNA 样品)的体积比混合。例如,如果 DNA 样品体积为 10μL,那么需要加入 2μL 的 6×loading buffer。这样可以保证 loading buffer 中的成分能够有效地发挥作用,同时不会过度稀释 DNA 样品。使用微量移液器准确地吸取相应体积的 6×loading buffer 加入到 DNA 样品管中。
轻轻混匀,注意避免产生气泡。可以通过轻微地上下颠倒或用手指轻弹管底的方式来混合,因为气泡可能会影响加样的准确性,而且在电泳过程中可能会干扰 DNA 的迁移。
(三)加样
将混合好的含有 DNA 和 6×loading buffer 的样品,小心地加入到琼脂糖凝胶的加样孔中。使用微量移液器,将移液器的枪头垂直插入加样孔,缓慢地将样品推出枪头。加样时要注意不要让样品溢出加样孔,同时尽量避免枪头刺破凝胶,因为这可能会影响 DNA 的迁移路径和电泳结果。
(四)电泳
在完成加样后,盖上电泳槽盖子,开启电泳仪,按照预先设定的电压和时间进行电泳。例如,对于较小片段的 DNA(小于 1kb),在 1% 琼脂糖凝胶中可以使用 80 - 100V 的电压,电泳时间约为 30 - 40 分钟;对于较大片段的 DNA(大于 10kb),电压可以适当降低至 40 - 60V,电泳时间延长至 1 - 2 小时,具体情况需要根据实际的实验要求和 DNA 片段大小进行调整。在电泳过程中,可以观察示踪染料的迁移情况来判断电泳进程。