核酸的分离与提纯是分子生物学、生物医学探究及临床检测等范畴中至关重要的基础实验环节。其核心目标是从各类样本（例如血液、组织、细胞、病毒等）中分离并获取高纯度的DNA或RNA，为后续实施PCR扩增、基因测序、分子杂交、芯片检测等多种实验奠定基础。
实验操作原理
1、裂解环节：
首先，样本需经由物理与化学手段进行裂解。物理手段可能涵盖研磨、超声波破碎等，旨在破裂细胞膜，释放细胞内部的核酸。
化学试剂，如十二烷基硫酸钠（SDS）、酚/氯仿混合物、异戊醇等，则用于摧毁细胞结构，溶解蛋白质，并辅助将核酸与蛋白质、脂质及其他杂质分离开来。
2、除蛋白环节：
接下来，通过添加蛋白酶K来消化蛋白质，从而降低蛋白质对核酸的污染。
利用酚/氯仿抽提或离心柱技术，基于相分离原理，将核酸转移至水相，而蛋白质、多糖及其他有机物则主要分布于有机相。
3、沉淀与清洗环节：
通常，会采用乙醇或异丙醇在适宜条件下使核酸沉淀。
沉淀后，需用高浓度乙醇进行多次清洗，以去除盐分及其他残留的小分子杂质。
4、干燥与溶解环节：
将核酸沉淀彻底干燥后，使用无RNA酶/DNA酶的水或缓冲液进行溶解。
对于RNA的提取，还需额外添加RNA酶抑制剂，以防止RNA被降解。
5、提纯环节：
可采用离心柱结合硅胶膜吸附技术或磁珠分离技术，通过特定的洗脱条件，有选择地捕获并洗脱核酸。
若需进一步提升纯度，可通过柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）切胶回收等手段来实现。
实验注意事项
一、操作要点
1. 确保所有实验材料与设备均保持无菌状态且无核酸酶活性。
2. 所有操作步骤均需在冰上完成，以延缓核酸的降解过程。
3. 裂解液需与样品充分混合，以确保样品完全裂解。
4. 抽提过程中需严格控制时间、温度及离心力等参数。
5. 在RNA提纯时，需特别注意避免DNA的污染，可加入DNA酶进行处理。
二、特别提醒
1. 根据样本类型的不同，需灵活调整裂解方法及裂解液配方。
2. 进行酚/氯仿抽提时，需注意其毒性与挥发性，操作应在通风良好的环境中进行。
3. 避免核酸的反复冻融，以防止其降解。
4. 核酸的浓度与纯度检测：利用紫外分光光度计测定OD260/OD280比值来评估纯度，而OD260/OD230则可用于评估样品中有机污染物的残留情况。
5. 核酸应储存在-20℃至-80℃的低温冰箱中，并尽快使用以保持其最佳活性。
实验操作原理
1、裂解环节：
首先，样本需经由物理与化学手段进行裂解。物理手段可能涵盖研磨、超声波破碎等，旨在破裂细胞膜，释放细胞内部的核酸。
化学试剂，如十二烷基硫酸钠（SDS）、酚/氯仿混合物、异戊醇等，则用于摧毁细胞结构，溶解蛋白质，并辅助将核酸与蛋白质、脂质及其他杂质分离开来。
2、除蛋白环节：
接下来，通过添加蛋白酶K来消化蛋白质，从而降低蛋白质对核酸的污染。
利用酚/氯仿抽提或离心柱技术，基于相分离原理，将核酸转移至水相，而蛋白质、多糖及其他有机物则主要分布于有机相。
3、沉淀与清洗环节：
通常，会采用乙醇或异丙醇在适宜条件下使核酸沉淀。
沉淀后，需用高浓度乙醇进行多次清洗，以去除盐分及其他残留的小分子杂质。
4、干燥与溶解环节：
将核酸沉淀彻底干燥后，使用无RNA酶/DNA酶的水或缓冲液进行溶解。
对于RNA的提取，还需额外添加RNA酶抑制剂，以防止RNA被降解。
5、提纯环节：
可采用离心柱结合硅胶膜吸附技术或磁珠分离技术，通过特定的洗脱条件，有选择地捕获并洗脱核酸。
若需进一步提升纯度，可通过柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）切胶回收等手段来实现。
实验注意事项
一、操作要点
1. 确保所有实验材料与设备均保持无菌状态且无核酸酶活性。
2. 所有操作步骤均需在冰上完成，以延缓核酸的降解过程。
3. 裂解液需与样品充分混合，以确保样品完全裂解。
4. 抽提过程中需严格控制时间、温度及离心力等参数。
5. 在RNA提纯时，需特别注意避免DNA的污染，可加入DNA酶进行处理。
二、特别提醒
1. 根据样本类型的不同，需灵活调整裂解方法及裂解液配方。
2. 进行酚/氯仿抽提时，需注意其毒性与挥发性，操作应在通风良好的环境中进行。
3. 避免核酸的反复冻融，以防止其降解。
4. 核酸的浓度与纯度检测：利用紫外分光光度计测定OD260/OD280比值来评估纯度，而OD260/OD230则可用于评估样品中有机污染物的残留情况。
5. 核酸应储存在-20℃至-80℃的低温冰箱中，并尽快使用以保持其最佳活性。
