第一步，探讨PRMT1在肝细胞癌中上调的机制
已有结果显示，PRMT1的蛋白水平在HCC中上调，但PRMT1 mRNA水平没有变化。推测泛素-蛋白酶体降解可能参与PRMT1的上调。用两种不同的蛋白酶体抑制剂处理细胞，发现PRMT1蛋白水平呈剂量依赖性增加（图1a），表明PRMT1的蛋白水平可以通过泛素介导的降解来调节。
第二步，确定PRMT1降解的关键泛素连接酶
根据设计的筛选策略，E3泛素连接酶FBXO7为候选互作蛋白（图1b-c）。IP-MS分析显示FBXO7是前10个与PRMT1相互作用的候选E3连接酶中唯一的E3泛素连接酶（图1d）。
第三步，确定FBXO7作为E3连接酶参与PRMT1的降解及其互作关系
外源、内源Co-IP实验显示FBXO7与PRMT1相互作用（图1e-h）。Co-IP实验发现，敲减PRMT1后，FBXO7与PRMT1相互作用减弱（图1i-j）。另外，GST pulldown实验证实FBXO7与PRMT1直接相互作用（图1k）。
第四步，确定FBXO7与PRMT1结合的具体位置
Co-IP分析发现PRMT1与FBXO7的结合需要PRMT1的催化结构域(23-162aa)（图1l-n），而FBXO7与PRMT1的结合需要FBXO7的泛素样结构域(UBL，1-78aa)和FBXO7-PI31二聚化结构域(FP，181-324aa)（图1o-q）。表明FBXO7与PRMT1直接相互作用。
图1 FBXO7与PRMT1相互作用
全文分享请查阅：【《NC》解读：泛素化-甲基化-氨基酸代谢机制，FBXO7 泛素化 PRMT1、抑制PDGDH7甲基化-丝氨酸合成，发挥抑癌功能！】。
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