基因敲低和基因敲除是两种不同的基因工程技术,它们在目的、方法和效果上存在显著的区别。
基因敲低是通过人为方式干扰RNA,使得基因表达降低,进而让蛋白质无法正常工作,从而改变生物体的性状。这种技术并不涉及靶基因DNA遗传信息的变化,因此基本上是不可遗传的。常见的RNA干扰(RNAi)方法是通过抑制RNA转录或促进RNA降解来降低RNA水平,从而影响其翻译成蛋白质及抑制相关蛋白质功能。
基因敲除则是一种更为彻底的基因工程技术,它通过在基因或基因组水平上造成DNA突变或缺失,从而永久性地阻止靶基因的表达。这种技术利用锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)和规律性间隔短回文序列重复簇(CRISPR)等方法进行基因/基因组编辑,实现对基因组上的目的基因进行突变、缺失或插入。基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,其效果通常可以稳定遗传给下一代。
在构建基因敲低或基因敲除的细胞系时,选择适当的方法和技术至关重要。例如,在构建基因敲除细胞系时,可以根据实验需求选择移码敲除或大片段敲除等方法。移码敲除可能导致不彻底的敲除效果,而大片段敲除则可以更有效地解决这一问题。同时,使用转座子系统构建敲除质粒,并通过电转等方式将其导入细胞,也是常见的构建方法。
总的来说,基因敲低和基因敲除在目的、方法和效果上各有特点,选择哪种技术取决于具体的实验需求和目标。同时,随着基因编辑技术的不断发展,未来可能会有更多新的方法和工具出现,为基因工程研究提供更多可能性。
基因敲低是通过人为方式干扰RNA,使得基因表达降低,进而让蛋白质无法正常工作,从而改变生物体的性状。这种技术并不涉及靶基因DNA遗传信息的变化,因此基本上是不可遗传的。常见的RNA干扰(RNAi)方法是通过抑制RNA转录或促进RNA降解来降低RNA水平,从而影响其翻译成蛋白质及抑制相关蛋白质功能。
基因敲除则是一种更为彻底的基因工程技术,它通过在基因或基因组水平上造成DNA突变或缺失,从而永久性地阻止靶基因的表达。这种技术利用锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)和规律性间隔短回文序列重复簇(CRISPR)等方法进行基因/基因组编辑,实现对基因组上的目的基因进行突变、缺失或插入。基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,其效果通常可以稳定遗传给下一代。
在构建基因敲低或基因敲除的细胞系时,选择适当的方法和技术至关重要。例如,在构建基因敲除细胞系时,可以根据实验需求选择移码敲除或大片段敲除等方法。移码敲除可能导致不彻底的敲除效果,而大片段敲除则可以更有效地解决这一问题。同时,使用转座子系统构建敲除质粒,并通过电转等方式将其导入细胞,也是常见的构建方法。
总的来说,基因敲低和基因敲除在目的、方法和效果上各有特点,选择哪种技术取决于具体的实验需求和目标。同时,随着基因编辑技术的不断发展,未来可能会有更多新的方法和工具出现,为基因工程研究提供更多可能性。