什么是细胞冻存？
细胞冻存是将细胞置于-196℃液氮中低温保存，这样可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，以便需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件丢失细胞，起到了细胞保种的作用。
为什么要进行细胞冻存？
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
一、慢冻→两种办法：
手动降温：将细胞依序放在4℃（30分钟）、-20℃（1小时）、-80℃（过夜）后移至液氮中保存。
程序降温盒：是一般最广泛使用的降温法，为一种特制冷冻容器（填充异丙醇或依靠特制金属导热），使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃（过夜），然后移至液氮中保存。
二、快融：
将冻存在液氮中的细胞冻存管快速移至已37℃预热的水浴锅中（水面需低于管口，避免水分意外进入冻存管造成潜在污染），使细胞冷冻悬液迅速融化，此做法能让细胞冷冻悬液快速通过-20℃~0℃这个结晶形成温度范围，避免冰晶进入细胞形成再结晶，对细胞造成二次伤害。
FAQ：
问 题
建 议
有毒的冷冻保存液
根据制造商的说明使用商业上可获得的和定义的介质。解冻后立即取出冷冻保护剂。不允许细胞在低温保护介质中保持室温。
不适当的冷却速率
使用-1℃/min的逐渐冷却速度。要达到这个速度，可以使用保温的冷冻容器或控制速度的冷冻机。
冷冻后的温度变化
保持细胞在-130℃后的低温。运输时要将细胞放在干冰上，并确保液氮罐被正确地装满。
不当的解冻速率
细胞必须迅速解冻。使用37℃水浴解冻冻存管
不正确的细胞密度
根据不同的细胞类型选择冻存的细胞密度。常见的细胞冻存密度是1-10*106cells/ml。
必要的话，要进行细胞最佳冻存密度测试。
细胞冻存需要什么？
●超低温冰箱或液氮罐
●0.25%胰蛋白酶
●20%以上血清的完全培养液或血清
●DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121℃蒸气高压消毒)
●专用细胞冻存管，程序降温盒
●吸管、离心管、喷灯、冻存管架
细胞冻存怎么做
一、细胞收集
贴壁细胞：选择处于对数生长期的细胞，将培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。去掉胰蛋白酶后加入适量培养基终止消化。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液后离心。
悬浮细胞：直接将细胞收集到离心管后离心。
二、保护剂添加
去上清，加入含20%以上小牛血清的完全培养基或血清，于4℃预冷15分钟后，加入10%的DMSO，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，分装于细胞冻存管，细胞浓度为3×10^6～1×10^7cells/ml之间。将装有细胞悬液的冻存管盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记。
三、细胞冻存
细胞冻存一般是慢冻：先将冻存管置入置于4℃ 30-40 min，再转入-20℃ 2h后，再放入-80℃冰箱冷冻过夜后保存到液氮罐中。
细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融，细胞冻存后可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一支冻存管的细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞冻存液的选择
细胞冻存液，作为细胞冻存时必须使用的一种溶液，不仅仅是说只是用来进行细胞的保存，在细胞的购买、寄赠、交换和运送过程中也起着关键作用，因此选择一款好的细胞冻存液就尤为重要。
如果不加任何条件直接冻存细胞，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH值改变、蛋白变性等，从而引起细胞死亡。而细胞冻存液就相当于细胞的保护剂，在冻存细胞时将细胞悬浮于冻存液中，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞，可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤作用。这样就使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。
传统细胞冻存液
传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，统称为含血清细胞冻存液。
含血清细胞冻存液的一般的冻存方法是梯度降温冻存法，
如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），最后才移至液氮罐中进行长期的储存。
（其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量的死亡。）
无血清细胞冻存液
无血清细胞冻存液，不含血清，含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分、pH调节剂等成分。不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等污染，确保冻存细胞安全。通用于各种动物细胞株。2-8℃即可稳定保存，无需冷冻，即取即用。冻存细胞，无需程序降温。冻存细胞复苏率在90%以上。
用途
1.无血清细胞冻存液用于造血干细胞、间充质干细胞等干细胞的储存。
2.无血清细胞冻存液用于T淋巴细胞、NK细胞等免疫细胞的存储。
3.无血清细胞冻存液用于其他类型哺乳动物细胞的储存。
产品性能
1.不含牛血清，无动物源组分。
传统的冻存液，一般由胎牛血清、DMSO等组分组成。胎牛血清取自牛，因此，难以应用到需要避免接触动物源的应用领域。用包括人白蛋白等蛋白组分替代血清的用途，无动物源组分。
2.2-8℃即可稳定保存，无需冷冻，即取即用。
为了避免反复冻融，传统的细胞冻存液，需要分装成小管后置于-20℃环境下保存。细胞沉淀加无血清细胞冻存液，直接放入-80℃长期储存即可，无需再进行分装。
细胞冻存是将细胞置于-196℃液氮中低温保存，这样可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，以便需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件丢失细胞，起到了细胞保种的作用。
为什么要进行细胞冻存？
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
一、慢冻→两种办法：
手动降温：将细胞依序放在4℃（30分钟）、-20℃（1小时）、-80℃（过夜）后移至液氮中保存。
程序降温盒：是一般最广泛使用的降温法，为一种特制冷冻容器（填充异丙醇或依靠特制金属导热），使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃（过夜），然后移至液氮中保存。
二、快融：
将冻存在液氮中的细胞冻存管快速移至已37℃预热的水浴锅中（水面需低于管口，避免水分意外进入冻存管造成潜在污染），使细胞冷冻悬液迅速融化，此做法能让细胞冷冻悬液快速通过-20℃~0℃这个结晶形成温度范围，避免冰晶进入细胞形成再结晶，对细胞造成二次伤害。
FAQ：
问 题
建 议
有毒的冷冻保存液
根据制造商的说明使用商业上可获得的和定义的介质。解冻后立即取出冷冻保护剂。不允许细胞在低温保护介质中保持室温。
不适当的冷却速率
使用-1℃/min的逐渐冷却速度。要达到这个速度，可以使用保温的冷冻容器或控制速度的冷冻机。
冷冻后的温度变化
保持细胞在-130℃后的低温。运输时要将细胞放在干冰上，并确保液氮罐被正确地装满。
不当的解冻速率
细胞必须迅速解冻。使用37℃水浴解冻冻存管
不正确的细胞密度
根据不同的细胞类型选择冻存的细胞密度。常见的细胞冻存密度是1-10*106cells/ml。
必要的话，要进行细胞最佳冻存密度测试。
细胞冻存需要什么？
●超低温冰箱或液氮罐
●0.25%胰蛋白酶
●20%以上血清的完全培养液或血清
●DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121℃蒸气高压消毒)
●专用细胞冻存管，程序降温盒
●吸管、离心管、喷灯、冻存管架
细胞冻存怎么做
一、细胞收集
贴壁细胞：选择处于对数生长期的细胞，将培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。去掉胰蛋白酶后加入适量培养基终止消化。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液后离心。
悬浮细胞：直接将细胞收集到离心管后离心。
二、保护剂添加
去上清，加入含20%以上小牛血清的完全培养基或血清，于4℃预冷15分钟后，加入10%的DMSO，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，分装于细胞冻存管，细胞浓度为3×10^6～1×10^7cells/ml之间。将装有细胞悬液的冻存管盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记。
三、细胞冻存
细胞冻存一般是慢冻：先将冻存管置入置于4℃ 30-40 min，再转入-20℃ 2h后，再放入-80℃冰箱冷冻过夜后保存到液氮罐中。
细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融，细胞冻存后可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一支冻存管的细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞冻存液的选择
细胞冻存液，作为细胞冻存时必须使用的一种溶液，不仅仅是说只是用来进行细胞的保存，在细胞的购买、寄赠、交换和运送过程中也起着关键作用，因此选择一款好的细胞冻存液就尤为重要。
如果不加任何条件直接冻存细胞，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH值改变、蛋白变性等，从而引起细胞死亡。而细胞冻存液就相当于细胞的保护剂，在冻存细胞时将细胞悬浮于冻存液中，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞，可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤作用。这样就使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。
传统细胞冻存液
传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，统称为含血清细胞冻存液。
含血清细胞冻存液的一般的冻存方法是梯度降温冻存法，
如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），最后才移至液氮罐中进行长期的储存。
（其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量的死亡。）
无血清细胞冻存液
无血清细胞冻存液，不含血清，含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分、pH调节剂等成分。不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等污染，确保冻存细胞安全。通用于各种动物细胞株。2-8℃即可稳定保存，无需冷冻，即取即用。冻存细胞，无需程序降温。冻存细胞复苏率在90%以上。
用途
1.无血清细胞冻存液用于造血干细胞、间充质干细胞等干细胞的储存。
2.无血清细胞冻存液用于T淋巴细胞、NK细胞等免疫细胞的存储。
3.无血清细胞冻存液用于其他类型哺乳动物细胞的储存。
产品性能
1.不含牛血清，无动物源组分。
传统的冻存液，一般由胎牛血清、DMSO等组分组成。胎牛血清取自牛，因此，难以应用到需要避免接触动物源的应用领域。用包括人白蛋白等蛋白组分替代血清的用途，无动物源组分。
2.2-8℃即可稳定保存，无需冷冻，即取即用。
为了避免反复冻融，传统的细胞冻存液，需要分装成小管后置于-20℃环境下保存。细胞沉淀加无血清细胞冻存液，直接放入-80℃长期储存即可，无需再进行分装。
