细胞凋亡途径中各事件的发生是有时序性的,即各事件按先后顺序依次发生,zui终导致凋亡小体的出现,细胞随着发生凋亡。典型特征为:细胞膜PS(磷脂酰丝氨酸)的外翻;线粒体膜电位的丧失;细胞核凝缩和断裂。

一、PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测(Annexin V法)
在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的 Annexin-V 作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。另外,碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将 Annexin-V 与 PI 匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
二、TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)
细胞凋亡晚期, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3-OH形成,很少能够被染色。TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定,并可检测出J少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
三、相关研究工具
货号 名称 样本类型 检测仪器
KTA0001 Annexin V-AbFluor™ 408细胞凋亡检测试剂盒 活细胞 倒置荧光显微镜正置荧光显微镜(细胞涂片)激光共聚焦显微镜细胞流式仪
KTA0002 Annexin V-AbFluor™ 488细胞凋亡检测试剂盒 活细胞
KTA0003 Annexin V-AbFluor™ 555细胞凋亡检测试剂盒 活细胞
KTA0004 Annexin V-AbFluor™ 647细胞凋亡检测试剂盒 活细胞
KTA2010 TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒 (绿色荧光) 活细胞固定细胞组织 正置荧光显微镜激光共聚焦
KTA2011 TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒 (橙色荧光)
BMD00062 Hoechst 33342 细胞组织 荧光显微镜细胞流式仪激光共聚焦
BMD00063 DAPI
来源:Abbkine

一、PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测(Annexin V法)
在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的 Annexin-V 作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。另外,碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将 Annexin-V 与 PI 匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
二、TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)
细胞凋亡晚期, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3-OH形成,很少能够被染色。TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定,并可检测出J少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
三、相关研究工具
货号 名称 样本类型 检测仪器
KTA0001 Annexin V-AbFluor™ 408细胞凋亡检测试剂盒 活细胞 倒置荧光显微镜正置荧光显微镜(细胞涂片)激光共聚焦显微镜细胞流式仪
KTA0002 Annexin V-AbFluor™ 488细胞凋亡检测试剂盒 活细胞
KTA0003 Annexin V-AbFluor™ 555细胞凋亡检测试剂盒 活细胞
KTA0004 Annexin V-AbFluor™ 647细胞凋亡检测试剂盒 活细胞
KTA2010 TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒 (绿色荧光) 活细胞固定细胞组织 正置荧光显微镜激光共聚焦
KTA2011 TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒 (橙色荧光)
BMD00062 Hoechst 33342 细胞组织 荧光显微镜细胞流式仪激光共聚焦
BMD00063 DAPI
来源:Abbkine