胎牛血清主要用于细胞生长和增殖,维持细胞正常生理状态。其中,促生长试验是评价胎牛血清的质量指标之一。好的胎牛血清,既不能添加一些额外的生长因子,又不能缺乏天然的必要的营养。
对于天然采集的胎牛血清,促细胞生长能力是一个总的评价指标。那么,这个指标是如何进行检测的呢?下面小编为你分析一下。
其中一项关键指标是它表现为细胞克隆率。
它是指细胞在低密度下的接种,然后观察克隆的形成。对于评估血清批次的品质,这是一个非常灵敏的检查。它反映细胞总体或平均的生长状况。
对于每个血清批次,可先加20mlFBS到180mlEMEM中,0.22μm过滤除菌,4℃保存。
对每个细胞系和每个批次血清,标记10个直径60mm的平皿。标记在平皿的侧壁靠下部分,包括对照。
每个平皿加入5ml含10%待测FBS的培养基,加入400个细胞。
在细胞培养箱中37℃,5%CO2孵育10-14天。
弃掉上清,加入足量石炭酸复红-亚甲基蓝溶液,覆盖每个平皿,作用10分钟。
弃掉染液,用蒸馏水冲洗几遍。平皿倒置在吸水纸巾上,风干。
计数并记录阳性克隆数,以及阳性染色克隆的总表面积(Mm2)。计算均值和标准差。
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接受标准:接种效率%=克隆数÷接种细胞数×100,比较FBS批次之间的结果,选择一个好的批次。
无论是胎牛血清,还是新生牛血清,细胞克隆率都可反映血清促细胞生长的能力。好的血清,细胞克隆率高。以新到货的Ausbian精制新生牛血清为例,该批次的细胞克隆率检测为86%,在可接受范围内,品质还是很好的。总之,细胞克隆率是反映血清的一个质量标准,值得关注。
对于天然采集的胎牛血清,促细胞生长能力是一个总的评价指标。那么,这个指标是如何进行检测的呢?下面小编为你分析一下。
其中一项关键指标是它表现为细胞克隆率。
它是指细胞在低密度下的接种,然后观察克隆的形成。对于评估血清批次的品质,这是一个非常灵敏的检查。它反映细胞总体或平均的生长状况。
对于每个血清批次,可先加20mlFBS到180mlEMEM中,0.22μm过滤除菌,4℃保存。
对每个细胞系和每个批次血清,标记10个直径60mm的平皿。标记在平皿的侧壁靠下部分,包括对照。
每个平皿加入5ml含10%待测FBS的培养基,加入400个细胞。
在细胞培养箱中37℃,5%CO2孵育10-14天。
弃掉上清,加入足量石炭酸复红-亚甲基蓝溶液,覆盖每个平皿,作用10分钟。
弃掉染液,用蒸馏水冲洗几遍。平皿倒置在吸水纸巾上,风干。
计数并记录阳性克隆数,以及阳性染色克隆的总表面积(Mm2)。计算均值和标准差。
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接受标准:接种效率%=克隆数÷接种细胞数×100,比较FBS批次之间的结果,选择一个好的批次。
无论是胎牛血清,还是新生牛血清,细胞克隆率都可反映血清促细胞生长的能力。好的血清,细胞克隆率高。以新到货的Ausbian精制新生牛血清为例,该批次的细胞克隆率检测为86%,在可接受范围内,品质还是很好的。总之,细胞克隆率是反映血清的一个质量标准,值得关注。