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科普细胞分离液的应用

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组织和血液中的细胞常非单一类型,因此分离特定的细胞需要采用专门的方法。其中,最常用的是密度梯度离心法。即通过细胞分离液在离心管内形成连续或不连续的密度梯度,将细胞悬液置于液体的上部,通过离心力场的作用使细胞分层分离。
在市面上常见的细胞分离液中,Biocoll是常用且较为知名的一种。它诞生于2007年,当时发现一种亲水高分子聚合物,分子量约为400Kda,用于分离淋巴细胞和胰岛细胞效果良好,可很好地保持所分离细胞的功能。随后,Biocoll细胞分离液被美国NIH指定为胰岛细胞的专用分离液。
Biocoll是德国Biochrom公司出品,有1.10g/ml和1.077g/ml两种。1.10g/ml可再用无钙镁离子的PBS调节为其他浓度。现北京缔一生物备有1.10g/ml密度的Biocoll分离液现货,方便研究者对血细胞或淋巴细胞的分离。
对于淋巴细胞分离,它的使用步骤如下:
1)将7mLBiocoll细胞分离液(D=1.077g/mL, 20℃)放入15mL离心管中。或将10ml Biocoll细胞分离液放入25mL离心管中。
2)将肝素化抗凝全血(50U/mL肝素,无稳定剂)与等体积培养基混合均匀,小心添加在Biocoll细胞分离液的液面上。
3)1200g离心20min。
4)用巴斯德吸管吸取(70-100%)淋巴细胞富集层(位于血浆和Biocoll之间),加入培养基中洗2次,一次300g离心10min,另一次200g离心10min,即可得所需淋巴细胞,接着可进行常规细胞计数。

Biocoll细胞分离液为即用型,渗透压和pH值已调整为最适水平。下图为不同类型血细胞对应的分离密度。

如果您对以上产品感兴趣,可与威正翔禹/缔一生物联系。


1楼2020-10-22 15:38回复