索莱宝吧 关注:1,000贴子:2,586
  • 3回复贴,共1

蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

只看楼主收藏回复

细菌蓝白斑筛选原理:
IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。
但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。


1楼2019-10-21 09:27回复
    使用浓度:
    IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml
    直接涂板法:
    取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。
    预制板:
    倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。


    2楼2019-10-21 09:27
    回复
      2025-06-22 16:37:51
      广告
      注意:
      1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;
      2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;
      3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。


      3楼2019-10-21 09:28
      收起回复