转染吧 关注:29贴子:129
  • 2回复贴,共1

转染sw480细胞的目的基因效率不高

只看楼主收藏回复

我用lipo2000转染SW480细胞,两个质粒都是用同一种试剂盒提取的,转染用量是根据lipo2000说明书上来的(24孔板0.8ug/孔)。为什么空载体的转染效率和空载的效率相差这么多?是什么原因导致这种差距的呢?


1楼2019-02-28 08:41回复
    这个是很常见的,因为在携带目的基因的载体中形成的是“目的基因+GFP”融合蛋白,GFP的荧光强度会因目的基因的大小和功能而受影响,故比同滴度转染的空载体对照组的GFP表达量低些。我觉得看荧光仅仅只能作为参考,通常我们用48h后qPCR检测或者72h后WB检测蛋白表达这两种方法来检测。我们实验室用RFect 做完细胞转染后,一般使用采用48h后qPCR检测看转染效率。


    2楼2019-02-28 14:47
    回复
      sw480结肠癌细胞很少有转染试剂能转得了,lipo3000转染效率太低, 后期就用病毒感染,前段时间看到西南大学的一篇文章写的是Advanced DNA RNA Transfection Reagent转了已经见刊,我们后面用了转染效率很高 ,用AURKA质粒转,细胞密度50%、96孔板每孔使用0.5μg质粒。


      3楼2020-06-07 09:13
      回复