操作步骤:
1、取 50-100ml 细菌培养物，11000rpm 离心 1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中） 。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 4ml 溶液 P1(请先检查是否已加入 RNaseA） ，使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入 4ml 溶液 P2，温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组 DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入 4ml 溶液 P3，立即温和地上下翻转 6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。11000rpm离心 10 min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。注意：溶液 P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5、加入上清 1/5 体积的冰上预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊，冰浴 2min 至溶液变清亮。
6、37℃水浴 5min,不时振荡，溶液又变浑浊。11000rpm 室温离心 5min，溶液应分为两相，上层水相含质粒 DNA，下层油相含内毒素。
7、将含质粒 DNA 的上层水相转移至新管，弃下层油相，注意不要吸入油状相。重复抽提三次，即重复步骤 5-7三次。
8、加入 12ml 的结合液，充分混匀后加入吸附柱中，室温放置 2min，11000rpm 离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。
9、向吸附柱中加入 8ml 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱中加入 6ml 漂洗液，11000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
11、11000rpm 离心 3min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
12、 将吸附柱放入一个干净的离心管中， 向吸附膜中央悬空滴加1-2ml经65℃水浴预热的洗脱液， 室温放置5min，11000rpm 离心 2min。
13、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置 5min，11000rpm 离心 2min。

注意事项:
1. 使用前请先检查溶液 P2、P3 和结合液是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
2. 洗脱缓冲液体积不应少于 1ml，体积过小影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)， pH值低于7. 0会降低洗脱效率， DNA产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。
3. 质粒DNA浓度＞1mg/ml时清除内毒素效率降低。 由于质粒DNA本身的性质， 清除过程可导致部分质粒DNA丢失，但内毒素却能得到最大限度清除。
4. 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制，所有器械材料均应不含内毒素，玻璃器皿可高温烘烤，非挥发性水溶液可高压处理。
5. DNA浓度及纯度检测： 得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、 操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD 260 处有显著吸收峰，OD 260 值为 1 相当于大约 50μg/ml双链DNA、 40μg/ml单链DNA。OD 260 /OD 280 比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。
相关试剂 ：
M1070 D2000 plus DNA Ladder
D1010 6×DNA Loading Buffer
T1060 50×TAE 缓冲液
T1050 5×TBE 缓冲液
G8142 GoldView II 型核酸染色剂 (5000×)
http://www.solarbio.com