夏秋两季,天气炎热,是狂犬病的高发季节。被狗咬了,当然要去打狂犬病疫苗,以预防狂犬病,但是问题就来了,有个别暴露后免疫者出于对狂犬病的恐惧,需要检测报告证实抗体阳性方可安心。也有一些犬伤门诊会主动推荐说加几十元就给检测抗体,看起来很方便的样子。但是绝大多数疾控中心都没有条件检测抗体,或者仅能进行ELISA法检测抗体阴性或阳性,而不能用世界卫生组织推荐的RFFIT法准确地检测抗体滴度,那么这ELISA和RFFIT两种检测方法有什么区别呢?
图片来自网络
世界卫生组织推荐的应用于狂犬病中和抗体检测的方法主要有小鼠中和试验(MNT)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT);我国2016版《狂犬病预防控制技术指南》、2014版《狂犬病监测方案》及2009版《狂犬病暴露预防处置工作规范》明确指出,如需检测狂犬病中和抗体水平,应当采取中和实验进行检测,主要包括RFFIT及MNT 2种方法。
RFFIT方法根据中和试验原理,采用固定梁的病毒与稀释的血清中和,残留的病毒感染力通过接种细胞,用荧光抗体试验检验其剩余病毒量,根据中和效价公式计算结果,具有良好的稳定性、敏感性及重复性。快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)是检测抗狂犬病毒抗体的“金标准”,但由于RFFIT需要使用狂犬病固定毒株CVS-11,以及价格昂贵的FITC标记的抗狂犬病病毒核蛋白荧光抗体,因此我国能采用此方法检测且面对公众服务的只有寥寥几家。
ELISA 法(酶联免疫吸附测定法),成本低,检验快。但由于ELISA 法用于检测狂犬病中和抗体的试剂生产技术方面的原因,其吸附抗原的纯度及组分的不同,检出抗体也不相同,是检测的包含狂犬病毒中和抗体在内的所有非特异性的抗狂犬病毒抗体,因此检测的特异性受到一定限制。同时,吸附的抗原量不稳定的因素,也影响了该方法的灵敏度。在广州市疾控中心刘华章等人的一项研究中,免疫第14天、第45 天的血清抗体应为100%阳性,经RFFIT 法检测结果亦呈100%阳性,而ELISA 法检测结果阳性率分别只有48.3%、86%,假阴性率高,灵敏度低[1]。长沙市疾病预防控制中心的熊春等人的一项研究也证实了这一结果[2]。
也就是说,根据以上试验结果,在第14天和第45天使用ELISA法检测抗体的人,分别有52%和14%的人,明明已经产生足够抗体,可测出来依然显示没有抗体,这样的假阴性结果会给医生及免疫者带来不必要的顾虑,多数会进行加强注射以期达到抗体阳性,个别甚至连续加强至10 多支疫苗,造成极大的浪费和心理压力。
实际上,我国的狂犬病疫苗在临床试验中,都能在第14天实现抗体100%阳转,其中产生抗体最快的人二倍体细胞狂犬病疫苗甚至在第14天的时候平均抗体水平高达19.7 IU/ml,是阳转标准0.5IU/ml的40倍。在实际应用中,每年接种几百万上千万人份,完全经受得住考验,因此,正常人接种完狂犬病疫苗后是完全没有必要去检测抗体的。即使因为强烈恐狂需要检测抗体才能安心,那也建议采用RFFIT方法进行检测,以避免出现假阴性造成更大的恐慌。[3, 4]
参考文献
[1]. 刘华章, 黄桂花, 曹庆, 刘远. ELISA法与RFFIT法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体的比较[J]. 热带医学杂志. 2008(05):497-9.
[2]. 熊春. ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的对比[J]. 中国卫生标准管理. 2016(13):159-60.
[3]. 吴小红, 董关木, L.Audry, H.Bourhy. ELISA与RFFIT 2种方法检测人狂犬病抗体的比较[J]. 药物分析杂志. 2010(10):1966-8.
[4]. 吴小红, L.Audry, H.Bourhy, 董关木, editors. ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的比较. 2010年中国药学大会暨第十届中国药师周; 2010; 中国天津.
说明:本文为我通过工作经验及整理文献写出,除此处外仅发布到头条号“免疫与健康”,欢迎转载,转载请说明出自百度贴吧狂犬病吧并附带原文链接。
图片来自网络
世界卫生组织推荐的应用于狂犬病中和抗体检测的方法主要有小鼠中和试验(MNT)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT);我国2016版《狂犬病预防控制技术指南》、2014版《狂犬病监测方案》及2009版《狂犬病暴露预防处置工作规范》明确指出,如需检测狂犬病中和抗体水平,应当采取中和实验进行检测,主要包括RFFIT及MNT 2种方法。
RFFIT方法根据中和试验原理,采用固定梁的病毒与稀释的血清中和,残留的病毒感染力通过接种细胞,用荧光抗体试验检验其剩余病毒量,根据中和效价公式计算结果,具有良好的稳定性、敏感性及重复性。快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)是检测抗狂犬病毒抗体的“金标准”,但由于RFFIT需要使用狂犬病固定毒株CVS-11,以及价格昂贵的FITC标记的抗狂犬病病毒核蛋白荧光抗体,因此我国能采用此方法检测且面对公众服务的只有寥寥几家。
ELISA 法(酶联免疫吸附测定法),成本低,检验快。但由于ELISA 法用于检测狂犬病中和抗体的试剂生产技术方面的原因,其吸附抗原的纯度及组分的不同,检出抗体也不相同,是检测的包含狂犬病毒中和抗体在内的所有非特异性的抗狂犬病毒抗体,因此检测的特异性受到一定限制。同时,吸附的抗原量不稳定的因素,也影响了该方法的灵敏度。在广州市疾控中心刘华章等人的一项研究中,免疫第14天、第45 天的血清抗体应为100%阳性,经RFFIT 法检测结果亦呈100%阳性,而ELISA 法检测结果阳性率分别只有48.3%、86%,假阴性率高,灵敏度低[1]。长沙市疾病预防控制中心的熊春等人的一项研究也证实了这一结果[2]。
也就是说,根据以上试验结果,在第14天和第45天使用ELISA法检测抗体的人,分别有52%和14%的人,明明已经产生足够抗体,可测出来依然显示没有抗体,这样的假阴性结果会给医生及免疫者带来不必要的顾虑,多数会进行加强注射以期达到抗体阳性,个别甚至连续加强至10 多支疫苗,造成极大的浪费和心理压力。
实际上,我国的狂犬病疫苗在临床试验中,都能在第14天实现抗体100%阳转,其中产生抗体最快的人二倍体细胞狂犬病疫苗甚至在第14天的时候平均抗体水平高达19.7 IU/ml,是阳转标准0.5IU/ml的40倍。在实际应用中,每年接种几百万上千万人份,完全经受得住考验,因此,正常人接种完狂犬病疫苗后是完全没有必要去检测抗体的。即使因为强烈恐狂需要检测抗体才能安心,那也建议采用RFFIT方法进行检测,以避免出现假阴性造成更大的恐慌。[3, 4]
参考文献
[1]. 刘华章, 黄桂花, 曹庆, 刘远. ELISA法与RFFIT法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体的比较[J]. 热带医学杂志. 2008(05):497-9.
[2]. 熊春. ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的对比[J]. 中国卫生标准管理. 2016(13):159-60.
[3]. 吴小红, 董关木, L.Audry, H.Bourhy. ELISA与RFFIT 2种方法检测人狂犬病抗体的比较[J]. 药物分析杂志. 2010(10):1966-8.
[4]. 吴小红, L.Audry, H.Bourhy, 董关木, editors. ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的比较. 2010年中国药学大会暨第十届中国药师周; 2010; 中国天津.
说明:本文为我通过工作经验及整理文献写出,除此处外仅发布到头条号“免疫与健康”,欢迎转载,转载请说明出自百度贴吧狂犬病吧并附带原文链接。