二、硅基片表面的氨基化处理 取出氨化烧杯(专用)，先用无水乙醇清洗2次，然后倒入20ml无水乙醇， 将步骤(2)反应后的获得的羟基化硅片转移到氨化烧杯中，用无水乙醇清洗3次。清洗时同步骤(2)，使硅片处于乙醇环境中;清洗完成后倒掉乙醇，迅速加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)和无水乙醇的混合液(体积比为1：15)，或者先加15ml无水乙醇，然后用移液管加1ml APTES，摇床上振摇反应2 h。该反应结束后可以使硅片表面氨基化。 三、硅基片的羧基化处理 (4) 倒掉上步反应液体，用无水乙醇清洗3次，清洗过程同上。清洗完后把硅 片转移到羧基化烧杯(专用)中，烧杯中含琥珀酸酐的无水乙醇饱和溶液，摇床振摇反应3 h以上或者过夜，该反应结束后可使硅片表面羧基化。将反应结束后的硅片用无水乙醇清洗后，保存于大量无水乙醇中待用。 注意：要保持各专用烧杯的清洁，处理过程中的硫酸要收集到废液瓶中，并做好标记。 经过上述步骤处理后的硅片表面已修饰有羧基官能团，再经过NHS/EDC(简称NE)活化后可与蛋白配基分子的氨基形成共价连接。 四、硅基片的甲基化处理 上接步骤(2)，接下来取出甲基化烧杯(专用)，用三氯乙烯清洗，以形成三氯乙烯环境，将羟基化后的硅片用镊子小心夹持，放入疏水烧杯中，正面朝上;用三氯乙烯清洗3次，清洗过程同上。倒掉液体，将20ml三氯乙烯和3ml二氯二甲基硅烷在专用的烧杯中混合均匀，再倒入盛有硅片的疏水烧杯中，反应5分钟;用无水乙醇清洗，再用三氯乙烯清洗;如此循环反复3次，将硅片用镊子小心夹持取出，放在盛有大量无水乙醇溶液的容器中，用封口膜封存。 注意：挥发性试剂的操作都必须在通风橱内进行。粘有硅烷的移液管和烧杯应立即用无水乙醇清洗。 五、硅基片的醛基化处理 上接步骤(3)，倒掉反应液体，用无水乙醇清洗3次，以除去氨基硅烷;再用去离子水清洗3次，以除去无水乙醇，以避免其与醛基反应;然后用PBS溶液清洗2次，以形成PBS环境，倒掉PBS溶液，将硅片亮面朝上，加入戊二醛和PBS的混合溶液(15 ml PBS，1.5 ml 50%戊二醛，体积比为1:10)，摇床振摇反应1 h。此反应结束后可使硅基片形成醛基化。倒掉反应液体，用大量 PBS清洗3次，然后将醛基化的硅片保存于PBS溶液中，以待下一步实验使用。 了