上海朝瑞生物科技有限公司—生物工程技术服务 18317038349//qq：2643711306
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1.酵母双杂交服务
酵母双杂交系统利用报告基因通过激活报告基因的表达探测蛋白－蛋白是否相互作用。单独的BD（DNA-binding domain，BD）虽然能和启动子结合，但是不能激活转录。而不同转录激活因子的DB和AD(activator domain)形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。含DNA -binding domain的载体和含DNA-activating domain的载体在构建融合基因时，测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达，其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。
操作流程
诱饵基因转化筛库宿主菌Y190——>含诱饵基因的Y190 保种——>诱饵基因的
自激活检测——>筛库(组织库或者小文库)——>挑选鉴定阳性克隆——>抽提阳
性克隆中PREY 质粒并在细菌中扩增——>猎物(Prey)质粒与诱饵(Bait)质粒共
同转化Y190，验证其相互作用
2.细胞凋亡(Tunel)分析
细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
3. SNP检测服务 —焦磷酸测序法（Pyrosequencing）
SNP(singlenucleotidepolymophism)，即单核苷酸多态，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。SNP在人基因组中的发生频率比较高，大约平均每1000个碱基中就有一个多态位点，是继微卫星之后的第三代遗传标记。有些SNP位点还会影响基因的功能，从而导致生物性状改变甚至致病。
SNP研究包括SNP发现（discovery）、SNP验证（validation）以及SNP筛选（ScreeningorScoring）。广泛用于群体遗传学研究（如生物的起源、进化及迁移等方面，将逐渐取代微卫星而成为新一代的分子生物学标记），和疾病相关基因的研究，在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。
焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术是新一代DNA序列分析技术，该技术无须进行电泳，DNA片段也无须荧光标记，操作极为简便。
Pyrosequencing技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应，在每一轮测序反应中，只加入一种dNTP,若该dNTP与模板配对，聚合酶就可以将其掺入到引物链中并释放出等摩尔数的焦磷酸基团（PPi）。
PPi可最终转化为可见光信号，并由PyrogramTM转化为一个峰值。每个峰值的高度与反应中掺入的核苷酸数目成正比。然后加入下一种dNTP,继续DNA链的合成。
德国QIAGEN公司基于Pyrosequencing技术而研究开发的PyroMark Q96 ID系统是一个强有力的测序和定量平台，非常适合表观遗传学、突变基因表达分析，以及微生物鉴定和抗性分型。96孔模式、自动化碱基读取功能以及专用的软件用于甲基化分析和实验设计，PyroMark Q96 ID能够解决任何需要真实序列信息以及需要定量的遗传和表观遗传变异的研究问题。
它具有以下优点：
1. 不需要制胶，不需要毛细管，也不需要荧光染料和同位素。2.一次可分析96个样品的SNP,可满足高通量分析的要求。3.每个样品孔都可进行独立的测序或SNP分析，实验设计灵活。4.序列分析简单，结果准确可靠。
4.RT-PCR/Realtime PCR分析
RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应（PCR）相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞/组织中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。
RT- PCR反应原理：1从细胞或特定组织中提取总RNA。 2逆转录实验。 3扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。
RT- PCR服务要求：客户须在实验开始前确保其细胞或组织中有目的基因的表达，并提供目的基因的相关信息。提供足量待检测目的基因的有关材料，共同探讨服务的可能性和技术路线。 RT-PCR过程中的所需引物，您可以委托本公司设计合成，也可以由您提供。
引物必须是PAGE纯化的高质量的干粉，一般我们不接受已溶解的引物。
实验步骤
1、 RNA提取从细胞或组织中提取 2、逆转录合成 3、PCR预实验 摸索扩增条件 4、PCR/Realtime PCR 扩增目的基因
5.Western Blot检测
Western Blot是用来鉴定特定蛋白的一种可靠方法，已广泛应用于蛋白的检测、抗体活性检测和疾病早期诊断等方面。
蛋白制备：如客户提供组织或细胞样本，我们会根据样本的特点，选择适当的蛋白提取方法提取蛋白，并检测好蛋白浓度；如客户需要重组蛋白，我们会根据客户具体的要求构建表达载体，选择合适的表达和纯化系统为客户制备重组蛋白。
蛋白电泳：采用SDS-PAGE电泳，电泳结束进行转膜，可采用湿转或半干转。
Western检测： 应用超敏快速Western试剂盒进行Western blot检测，包括目的蛋白的检测和内参蛋白的检测（推荐），如需要还可进行灰度分析。
注：此服务项目中，免费为客户提供二抗和Western Marker。
交货项目：内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张。实验报告，包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。
6.Micro RNA RealTime PCR检测
MicroRNA（miRNA）是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA，其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。迄今为此，对miRNA的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA qPCR Detection Kit采用了国际上公认的核酸检测标准技术――Real-Time PCR技术来对miRNA进行检测，其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
实验内容：RNA抽提、RNA 加“PolyA”处理、RNA反转录、定量PCR检测及其数据分析。
